دور در دقیقه

Round per minute

rpm

سدیم دودسیل سولفات –
ژل الکتروفورز پلیاکریل آمید

Sodium Dodecyl Sulfate –
Polyacryl Amide Gel Electrophoresis

SDS-PAGE

فصل اول

۱ مقدمه

۱-۱ اهمیت موضوع

به آنچه که کامل کننده رژیم غذایی مورد نیاز افراد است، “مکمل” گفته می شود. انرژی مکمل‌ها بر اساس نوع آن‌ ها متفاوت است. به طور کلی مکمل‌های غذایی شامل مواد غذایی یعنی کربوهیدرات‌ها، پروتئین‌ها، چربی‌ها، املاح، مواد معدنی و ویتامین‌ها هستند. از طرفی برخی مواد غذایی هستند که به طور طبیعی دارای اثراتی اثبات شده بر سلامتی می باشند اما مشاهده شده است که برخی مواد غذایی و یا نوشیدنی‌ها دارای اثراتی بر سلامتی هستند که این اثرات را نمی توان به محتوای مواد مغذی (نظیر درشت مغذی‌ها، ویتامین‌ها و یا مواد معدنی) آن ماده ی غذایی نسبت داد این مواد غذائی غذاهای عمل گرا نامیده می شوند. امروزه مصرف کنندگان در بسیاری از موارد ترجیح می دهند اقلام مورد نیاز خود را از بین غذاهای عمل گرا انتخاب کنند. غذاهای عمل گرا محصولاتی مشتق از مواد غذایی می باشند که علاوه بر ارزش تغذیه ای آن‌ ها، موجب ارتقای شرایط طبیعی فیزیولوژیک یا عملکرد ذهنی شده و یا در پیشگیری از اختلالاتی که می توانند به بیماری منجر شوند، موثر هستند (worldfood. ir).
هلیکو باکتر پیلوری شایع‌ترین موجود ذره‌بینی است که انسان‌ها را در بعد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است و بیش از نیمی از مردم دنیا آلوده به این باکتری هستند (انجمن میکروب شناسی آمریکا، ۲۰۱۳). این باکتری نوعی باکتری گرم منفی مارپیچی شکل و یک پاتوژن گوارشی انسان است و مهمترین علت بیماری‌های معده ای-روده ای از جمله گاستریک مزمن، زخم معده و دوازدهه، سرطان معده و لنفوما است (کاور و بلاسر،۱۹۹۵). بررسی‌های اپیدمیولوژی و آماری عفونت مزمن H. پیلوری را با سرطان بدخیم معده مرتبط دانسته اند و این امر موجب شده که آژانس پژوهش سرطان سازمان بهداشت جهانی (World Health Organization: WHO)این باکتری را در زمره ی عوامل سرطان زای کلاس I قرار دهد (سوارز و همکاران،۲۰۰۶). میزان عفونت H. پیلوری در جهان بطور میانگین ۵۰% است اما بین شیوع این عفونت در کشورهای غربی و کشورهای آسیایی در حال توسعه تفاوت معنی داری وجود دارد (مالاتی و نیرن،۲۰۰۷). به طوری که این میزان در کشورهای غربی حدودا ۳۰% جمعیت است که از این میان بین ۱/۰-۱ درصد به سرطان معده مبتلا می شوند در حالی که میزان عفونت در کشور‌های آسیائی بالاتر و در حدود ۸۰-۶۰ درصد است (سوربن و میچتی،۲۰۰۲). عفونت هلیکو باکتر پیلوری در ایران نیز شایع بوده و به خصوص سرطان معده از آمار بالائی بر خوردار است. این سرطان که مسئول مرگ ۶۵۰۰۰۰ نفر در جهان در سال ۲۰۰۰ است، در مردها پس از سرطان ریه دومین عامل مرگ و میر ناشی از سرطان بوده و در مجموع حدود ۱۰ درصد از کل مرگ و میر سالیانه سرطان را به خود اختصاص می دهد (پرینز و همکاران،۲۰۱۰). میزان عفونت H. پیلوری در جمعیت اردبیل بالا و در حدود ۸۹ درصد بوده است و یکی از بالاترین آمارهای جهان در رابطه با سرطان معده مربوط به استان اردبیل است که به تنهایی حدود یک سوم تمام موارد سرطان در اردبیل بین سال‌های ۱۹۹۶ تا ۱۹۹۹ مربوط به این سرطان بوده است (سجادی و همکاران،۲۰۰۳) (البرزی و همکاران،۲۰۰۶). به علاوه بررسی‌ها در شهر شیراز نیز ابتلای ۹۸-۸۲ درصد کودکان بین ۹ ماهه تا ۱۰ ساله را به این باکتری نشان می دهد (البرزی و همکاران،۲۰۰۶) (ندیمی و همکاران،۲۰۰۰). فاکتور بیماری زای cagA هلیکو باکتر پیلوری یک پروتئین با وزن مولکولی ۱۲۰-۱۴۵KD می باشد که در فاصله ی Kb 40 جزایر بیماری زائی[۱] کد شده است. گونه‌های هلیکو باکتر پیلوری از نظر دارا بودن ژن CagA به گونه‌های مثبت[۲] و منفی[۳] تقسیم میشوند که تقریبا ۶۰ درصد گونه‌های جدا شده از کشور‌های غربی و اکثریت گونه‌های جدا شده از شرق آسیا از نوع مثبت بودند (هاتاکیاما و هیگاشی،۲۰۰۵). عفونت هلیکو باکتر پیلوری با لنفومای MALT و سرطان معده در ارتباط است و تصور می شود که CagA در گسترش سرطان نقش داشته باشد (لکس،۲۰۰۵). ژن CagA فسفریله شده قادر به برقراری ارتباط با تیروزین فسفاتاز SHP-2 است که باعث عملکرد فعال و تغئیر ظاهری سلول میزبان به یک فنوتیپ متحرک تر می شود که به عنوان فنوتیپ مرغ مگس خوار شناخته شده است (هاتاکیاما و هیگاشی، ۲۰۰۵). این فنوتیپ شبیه به اثر تولید شده توسط فاکتور رشد کبدی بوده که ممکن است در جنبه‌های مختلف سرطان از جمله متاستاز دخالت داشته باشد (لکس،۲۰۰۵). همچنین CagA یک پروتئین دارای خاصیت آنتی ژنیکی بسیار قوی است که با واکنش‌های برجسته ی التهابی تولید شده به وسیله ی استخراج اینترلوکین-۸ در ارتباط است (یامائوکا،۲۰۱۰). تشخیص سرطان معده در مراحل اولیه دشوار است و در اکثر موارد تشخیص پس از پیشرفت بیماری صورت گرفته و کار درمان سخت می شود در نتیجه مانند التهاب و زخم معده راه اصلی مبارزه با این سرطان نابود کردن عفونت H. پیلوری است از طرفی به دلیل اینکه سیستم ایمنی بدن در مقابل H. پیلوری دارای مکانیسم دفاعی است و حتی طی مکانیز م‌های ویژ ه ای در خدمت بیمار یزایی باکتری قرار می گیرد و سبب تسهیل اتصال باکتری وتخریب بافت پوششی می شود مبارزه با این عفونت همواره با مشکلاتی همراه است. (سوارز و همکاران،۲۰۰۶). بعلاوه بررسی‌های اخیرنشان دهنده ی مقاومت نسبتا زیاد H. پیلوری به درمان‌های آنتی بیوتیکی است (موبلی و همکاران،۱۹۹۵). در نتیجه درمان‌های اخیر در جهت بکارگیری درمان‌های اختصاصی و نوین برای مقابله با این عفونت است که در این میان پروتئین CagA که یکی از پروتئین‌های H. پیلوری است هدف بالقوه مناسبی برای تولید آنتی بادی‌های اختصاصی به این منظور است. از سوی دیگر امروزه، در عرصه کاربرهای متنوع آنتی بادی‌ها، تکنولوژی جدید استخراج IgYاز زرده ی تخم مرغ در حال گسترش است. IgY که معادل IgG انسانی در پرندگان در نظر گرفته می شود در واقع از نظر تکاملی،نیای مادری IgG و IgE PESTAN(به خاطر محدودیت سایت در درج بعضی کلمات ، این کلمه به صورت فینگیلیش درج شده ولی در فایل اصلی پایان نامه کلمه به صورت فارسی نوشته شده است)داران است. این ایمنوگلوبین توسط مرغ تولید شده و برای ایجاد ایمنی غیر فعال برای جنین به درون زرده تخم مرغ انتقال می یابد. تکنولوژی IgY از این پدیده از طریق استخراج IgY از زرده ی تخم مرغ بهره می برد (بصیری و همکاران،۲۰۰۸). برای تولید یک واکسن موثر بر علیه هلیکو باکتر پیلوری، آنتی ژنی پایدار،حفاظت شده و قوی مورد نیاز است. امروزه تکنولوژی استفاده از آنتی ژنهای نوترکیب پروتئینی برای ایمن سازی به سمت شناسائی اپی توپ‌های اصلی آنتی ژن برای تحریک ایمنی و استفاده از آنها بجای پروتئین کامل پیش می رود. مطالعات نشان داده که پروتئین‌های نوترکیب در اکثر موارد خواص ساختاری پروتئین طبیعی را دارد. تولید پروتئین در حالت طبیعی بسیار اندک است اما میتوانیم در حالت نوترکیب به میزان دلخواه آن را افزایش دهیم بعلاوه خالص سازی پروتئین‌های نوترکیب نسبت به پروتئین‌های طبیعی راحت تر صورت میگیرد و در مورد باکتری‌های با رشد نسبتا کم و پر نیاز مثل هلیکوباکتر پیلوری تولید پروتئین‌های نوترکیب در مقایسه با پروتئین‌های طبیعی بسیار مقرون به صرفه است. در صورت استفاده از اپی توپ‌های اصلی آنتی ژن بجای آنتی ژن کامل علاوه بر کوچک شدن قطعه مورد بررسی و بالا رفتن اختصاصیت قطعه که باعث تحریک شدن پاسخ‌های ایمنی اختصاصی تر می شود تکثیر و ترکیب آن با سایر آنتی ژنها راحت تر صورت میگیرد (ابطحی و همکاران،۲۰۱۲). مطالعات نشان داده که در زرده ی تخم مرغ حاصل از مرغ‌های ایمن شده مقادیر زیادی آنتی بادی وجود دارد که میتوانند آنتی ژن‌ها را بطور اختصاصی شناسائی کنند و از نظر اقتصادی بسیار مقرون به صرفه هستند (وردولاوا و همکاران،۲۰۰۰). بعلاوه شاین و همکاران تاثیر Igy ضد H. پیلوری بدست آمده از مرغ‌های ایمن شده را گزارش کردند که در این مطالعه Igy موجب کاهش التهاب لایه مخاطی معده گردید. بعلاوه میزان التهاب با تعیین میزان لنفوسیت‌های بافتی و نفوذ نوتروفیل‌ها مشخص شد (شاین و همکاران،۲۰۰۳). بنابراین میتوان از آنتی بادی اختصاصی تولید شده در زرده ی تخم مرغ برای درمان بیماران مبتلا به عفونت H. پیلوری استفاده کرد.
عکس مرتبط با اقتصاد

۱-۲ اهداف تحقیق

با توجه به گسترش روز افزون بیماران مبتلا به هلیکو باکتر پیلوری در سطح ایران و جهان و عدم پاسخ دهی مناسب افراد مبتلا به عفونت H. پیلوری به درمان‌های آنتی بیوتیکی هدف از این تحقیق شناسائی و تعیین نواحی آنتی ژنتیک ژن CagA هلیکوباکتر پیلوری با بهره گرفتن از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی، ساخت ناقل نوترکیب حامل نواحی آنتی ژنتیک ژن CagA و تولید IgY بر علیه هلیکو باکتر پیلوری در زرده ی تخم مرغ می باشد. تا در آینده از طریق بهبود کیفت تخم مرغ و تولید غذاهای عمل گرا و مکمل به جلوگیری از عفونت ناشی از این باکتری کمک کند و یا در کیت‌های تشخیصی بکار گرفته شود.
فصل دوم

۲ بررسی منابع

۲-۱ مکمل‌ها و غذاهای عمل گرا

به آنچه که کامل کننده رژیم غذایی مورد نیاز افراد است، “مکمل” گفته می شود. مفهوم غذای عمل گرا (functional food) از آن جا شکل گرفت که مشاهدات نشان دادند که برخی مواد غذایی و یا نوشیدنی‌ها دارای اثراتی برسلامتی هستند که این اثرات را نمی توان به محتوای مواد مغذی نظیر درشت مغذی‌ها،ویتامین‌ها و مواد معدنی آن ماده ی غذایی نسبت داد. اگرچه ممکن است این واژه برای غذاهایی که تغییر یافته و یا با سایر مواد غذایی ترکیب شده اند به کار برود. امروزه غذای عمل گرا به ماده ی غذایی ای اطلاق می شود که دارای اثراتی فراتر از ارزش تغذیه ای و یا محتوای مواد مغذی خود بر سلامتی انسان باشد. بررسی‌ها نشان می دهند که امروزه مصرف کنندگان در بسیاری از موارد ترجیح می دهند اقلام مورد نیاز خود را از بین غذاهای عمل گرا انتخاب کنند. مهم ترین اثراتی که برای این مواد غذایی قابل ذکر است، عبارتند از: تأثیر بر ارتقای سیستم ایمنی، دارا بودن خصوصیات آنتی اکسیدانی، ضدالتهاب بودن، سمیت زدایی و یا اثرات کارافزایی (ارگوژنیک).