رونوشت های اولیه از این پروموتورها پیرایش می شوند و تولید mRNA هایی می کنند که فقط در ناحیه ۵´ غیرترجمه شونده با هم متفاوت است(۲۵).۱۵۸ نوکلئوتید ناحیه انتهایی ۵´mRNA آلفا آمیلاز کبدی با ۴۷ نوکلئوتید انتهایی غده بزاقی متفاوت است.
تحقیقات نشان می دهد که mRNA آلفا آمیلاز در کبد و غده بزاقی از یک توالی DNA یکسان به طور متفاوتی در بافت های مختلف رونویس و پردازش می شوند. رونوشت های ژن AMY2 به طور اختصاصی در غده مترشحه پانکراس بیان می شود(۶۰).
اما مطالعات نشان می دهد که بیان AMY2 به پانکراس محدود نمی شود و در سطح کم در سلول های کبدی بیان می شود(۳۹).

۲-۱۰-۱- تفاوت توالی انتهای ۵´ mRNA های آلفا آمیلاز کبدی و غدد بزاقی موش از لحاظ اندازه:

هیبریدهای بین cDNA ژن آلفا آمیلاز غدد بزاقی و mRNA کبدی موش، در تمام طول ۱۶۰۰ نوکلئوتیدی cDNA در مقابل آنزیم نوکلئاز S1 مقاومت نشان داده است، بدین معنی که ممکن است محل توالی مسئول تفاوت توالی بین mRNA غدد بزاقی و کبدی درنتهای یک یا دو انتهای نوع کبدی قرار داشته باشد (۳۶).
اتورادیو گرافی انجام شده که در شکل (۲-۵) مشاهده می شود نشان دهنده ی این است که توالی ای که بعنوان عامل تفاوت در سایز بین mRNA آلفا آمیلاز کبدی و غدد بزاقی شناخته می شود در انتهای ۵´ قرار دارد. در شکل (۲-۵) استراتژی به کار رفته در جدا سازی قطعات انتهایی ۵´ و۳´ mRNA آلفا آمیلاز کبدی و غدد بزاقی، استفاده از Rnase Hمی باشد(۲۵) .

شکل ۲- ۴- این شکل تکامل ژن آمیلاز انسانی را نشان می دهد. ژن کاذب –actinϒ که در شکل به صورت میله افقی نشان داده شده و رتروویروس ERVA1 در حدود ۴۰ میلیون سال پیش وارد ژنوم شده است
[۱۱]

[۱۲]شکل ۲-۵- نمایش قرار گیری توالی ای که بعنوان عامل تفاوت در سایز بین mRAN آلفا آمیلاز کبدی و غدد بزاقی است.

۲-۱۰-۲- مطالعات مربوط به آنالیز توالی mRNA آلفا آمیلاز کبدی:

برای تعیین توالی mRNA آلفا آمیلاز کبدی، استراتژی به کار رفته شامل آشکار سازی توالی cDNA آن بوده است(۲۵).

برای دانلود متن کامل پایان نامه به سایت fotka.ir مراجعه نمایید.

۲-۱۰-۳- خصوصیات mRNA آلفا آمیلاز کبدی :

نتایج مربوط به آنالیز توالی cDNA آلفا آمیلاز کبدی نشان دادند که انواع مختلف mRNA آلفا آمیلاز در کبد انباشته می شوند (شکل۲-۶). میزان ۱۷۷۳ نوکلئوتید از mRNA بزرگ از ۵´ تا ۳´ برای ۸۰ % از جمعیت mRNA آلفا آمیلاز کل محاسبه می شد. ۲۰ % باقی مانده تشکیل شده از نوع ۵´ کوچک است که دارای حدود ۳۰ نوکلئوتید اضافی در انتهای ۵´ اظافی خود می باشند(۲۵).

[۱۳]شکل ۲-۶- مقایسه شماتیکی از mRAN آلفا آمیلاز کبدی و بزاقی
در شکل (۲-۶)جعبه های باز نشان دهنده ی توالی های متداول mRNA آلفا آمیلاز کبدی و بزاقی است; ناحیه سیاه منطقه ای است که در انواع mRNA آلفا آمیلاز کبدی (L) و بزاقی (S) یافت می شود. نواحی هدایتگر مخصوص- بافتی، که بصورت سایه حاشور خورده است برای mRNA بزاقی بصورت مورب و برای کبدی بصورت عمودی نشان داده شده است(۶۰).
۲-۱۱- مهار کننده های آلفا آمیلاز:
مهار کننده‌های آمیلاز دسته‌ای از مواد هستند که با مهار فعالیت آمیلاز از جذب کربوهیدرات‌های پیچیده مانند نشاسته در بدن جلوگیری می کنند.
مکمل‌های حاوی مهار کننده آمیلاز با جلوگیری از تولید آمیلاز عملاً کربوهیدرات‌های پیچیده را بلوکه می کنند.این دسته از مواد بطور طبیعی در انواع بقولات و گندم و لوبیاها یافت می شوند.
در سال‌های ابتدایی استفاده از این مکمل‌ها توفیق چندانی از مصرف آنها حاصل نمی شد اما با پیشرفت روش‌های فرآوری و استخراج این دسته از مواد عملاً تاثیرگذاری آنها نیز افزایش پیدا کرد( ۷۱).
ازمهمترین مهار کننده های آلفا امیلاز چای سبز است که توضیح آن در قسمت بعد داده شده است.
۲-۱۱-۱-چای سبز:
گیاه چای سبز با نام علمی Camellia sinensis دارای برگ­های همیشه سبز و نوک تیز، دارای حالت چرمی، به رنگ سبز تیره و معطر می­باشد. گل­های آن سفید و دارای ۶ تا ۹ عدد گلبرگ می­باشد. این گیاه بومی آسیای شرقی می­باشد ولی به طور گسترده در همه جای جهان و شمال ایران کشت می‌شود.
چای علاوه بر اینکه می‌تواند در آب و هوای گرم رشد کند همچنین می‌تواند در ارتفاعاتی به بلندی ۲۱۰۰ متر از سطح دریا نیز رشد نماید. بهترین چای ها را می‌توان در ارتفاعات یافت جایی که برگهای آنها به آرامی رشد می‌کنند و طعم بهتری دارند. با توجه به ارتفاعی که چای در آنها می‌روید، برگهای تازه چای بین دو سال و نیم تا پنج سال طول می‌کشد تا برای چیدن آماده شوند. چای برگهای فراوانی دارد و گلهای آن بسیار شبیه گلهای کاملیاست اما تنها برگ های جوان و کوچک آن برای مصرف چیده می‌شوند. جوانه زدن چای در مناطق کم ارتفاع هر هفته صورت می‌گیرد ولی در ارتفاعات بالا، هفته‌ها طول می‌کشد(۱۰).
۲-۱۱-۲- فواید چای سبز:
بسیاری از خواص چای سبز مربوط به ماده ای به نام کتچین است که حدود ۳۰٪ از وزن برگ چای سبز را تشکیل می دهد. فعالیت آنتی اکسیدانی آن بسیار بالا بوده و بسیار قویتر عمل می کند. نوشیدن چای سبز می تواند احتمال ابتلا به بیماریهای مختلف را کاهش دهد، از بیماریهای ساده باکتریایی گرفته تا بیماریهای مزمنی چون بیماریهای قلبی، سکته، سرطان، مشکلات دهانی دندانی، و استئوپرز .
محققان مشاهده نموده اند که فواید چای سبز برای سلامتی بستگی به میزان مصرف آن دارد که بیشترین مصرف آن در کشورهای آسیایی حدود ۳ فنجان در روز است. ( که حدود ۲۴۰ ـ ۳۲۰ میلی گرم از پلی فنول بدن را تهیه می کند.)(۱۰)
در افرادی که به صورت روزانه چای سبز مصرف می‌نمایند احتمال ابتلاء به انواع بیماریها اعم از بیماریهای باکتریایی و یا عفونتهای سخت و همچنین بیماریهایی نظیر سرطان، سکته، بیماریهای قلبی ـ عروقی و بیماریهای استخوانی را کاهش می‌دهد.
یکی دیگر از فواید مصرف چای سبز، کاهش مرگ و میر به دلیل هر نوع بیماری مخصوصاً بیماری قلبی ـ عروقی می‌باشد. در مطالعه‌ای که در سال ۲۰۰۶ صورت گرفت محققان دریافتند که چای از هر نوع نوشیدنی دیگر حتی آب خالص ، برای سلامتی مفیدتر است زیرا چای نه تنها به خوبی آب خالص ، بدن را هیدراته(آب رسانی) می کند بلکه منبعی غنی از پلی فنول ها می‌باشد که از بیماریهای قلبی جلوگیری می‌کند.
در سال ۱۹۹۴ در ژاپن تحقیقی بر روی ۴۰۵۳۰ فرد در سنین بین ۴۰ تا ۷۹ سال انجام گرفت که به مدت ۱۱ سال به طول انجامید. در این گروه انتخاب شده ۸۰٪ از افراد روزانه حدود ۳ فنجان از چای سبز مصرف می‌نمودند. در این تحقیق مشاهده گردید که در افرادی که ۵ فنجان در روز چای سبز می‌نوشیدند،‌ در مقایسه با افرادی که ۱ فنجان چای می‌نوشیدند احتمال مرگ به دلیل هر بیماری خصوصاً به وسیله بیماریهای قلبی ـ عروقی بسیار کمتر بود . حتی این آمار نشان داد که تاثیر چای سبز بر روی زنان بیشتر از مردان می‌باشد.همچنین در مطالعه‌ای که بر روی زنانی که از چای سبز مصرف می‌کردند و کسانی که مصرف نمی‌کردند صورت گرفت، مشاهده شد که ریسک ابتلاء به سرطان سینه در زنانی که چای سبز مصرف می‌نمودند ۲۲٪ کمتر از افراد دیگر است(۱۰).
۲-۱۱-۲-۱-جلوگیری از بیماری گرفتگی رگها:
در ژاپن طی مطالعاتی جداگانه بر روی چای سبز به این نتیجه رسیدند که افرادی که ۵ فنجان و یا بیشتر از ۵ فنجان در روز چای سبز می‌نوشند احتمال ریسک ابتلاء به گرفتگی رگها ۱۶٪ در آنها کمتر است. میزان وجود رادیکالهای آزاد در رگها،‌ کلید ابتلاء به بیماریهای قلبی ـ عروقی می‌باشد. آخرین تحقیقات نشان داده‌اند که کتچینهای موجود در چای سبز مانع از درگیر شدن آنزیمها در تولید رادیکالهای آزاد موجود در رگها می‌گردد.
مشاهده شده است که چای سبز بوسیله کاهش کلسترول بد(LDL)، تری گلیسیرید،‌لیپید پروکسایدLipid Peroxides ( رادیکالهای آزادی که باعث تخریب کلسترول بد و چربیها می‌شود) و فیبرینوژن( پروتئینی که در خون وجود دارد و باعث لخته شدن خون می‌شود) ریسک ابتلاء به گرفتگی رگها را کاهش می‌دهد و باعث می‌شود میزان کلسترول خوب بیشتر از کلسترول بد در بدن باشد(۱۰).
۲-۱۱-۲-۲-تاثیر چای سبز روی افراد مبتلاء به تری گلیسیرید:
تحقیقات نشان داده‌اند که مصرف چای سبز برای سلامت قلب افرادی که دارای تری گلیسیرید بالا هستند بسیار مفید می‌باشد. آزمایشات نشان داده‌اند کتچینهای موجود در چای سبز که با میزان مصرف نسبت مستقیم دارد(dose-dependent) مانع از فعالیت لیپاز پانکراس می‌شود(آنزیمی که بوسیله پانکراس ترشح می‌شود و چربیها را هضم می نماید.) در نتیجه این عملیات، سرعت شکستن چربیها و تبدیل آنها به تری گلیسیرید و همچنین افزایش تری گلیسیرید در خونی که بعد از صرف غذا اندازه گیری می‌شود بسیار آهسته صورت می‌گیرند.
با توجه به اینکه افزایش تری گلیسیرید بعد از خوردن غذا یکی از مشخصه‌ های بیماری گرفتگی رگها است، نوشیدن ۲ فنجان چای سبز همراه با غذا، بسیار مفید می‌باشد(۱۰).
۲-۱۱-۲-۳- رقیق شدن خون و جلوگیری از لخته شدن آن : کتچینهای موجود در چای سبز بوسیله جلوگیری کردن از تشکیل مواد التهابی باعث رقیق شدن خون و مانع از ایجاد لختگی در خون می‌شود که این مواد التهابی از اسیدهای امگا ۶ بوجود آمده اند و در گوشت و سبزیجات روغنی غیر قابل اشباع نظیر ذرت و روغن سویا یافت می‌شوند(۱۰).
۲-۱۱-۲-۴- کاهش فشار خون و جلوگیری از ابتلاء به آن:
طبق تحقیقات صورت گرفته استفاده از چای سبز از پیشرفت سرطان و گرفتگی رگها جلوگیری می‌کند.
دلیل به وجود آمدن هر دو بیماری رشد غیر طبیعی سلولهای بدن است .در گرفتگی رگها، سلولها ضخیم‌تر شده، حالت ارتجاعی خود را از دست می‌دهند و مانع از جریان یافتن راحت خون در رگها می‌گردند.
در سرطان، تقسیم سلولی که به صورت طبیعی انجام می‌گردد، ناگهان مختل شده و تقسیم سلولها از کنترل خارج می‌گردد. در این مورد چای سبز می‌تواند از تکثیر بیش از اندازه سلولها جلوگیری نماید.
کتچینهایی که در برگ جای سبز وجود دارد، اولین ایستگاه واسطه‌ای را که از طریق آن دستور رشد غیر طبیعی به سلولها فرستاده می‌شود، از بین می‌برد و از روند بیماریهایی که به واسطه رشد غیر طبیعی سلولها ایجاد می‌شود، جلوگیری و یا ممانعت می‌کند(۱۰).
۲-۱۱-۲-۵-به حداقل رساندن میزان صدمات وارد شده به مغز و قلب:
طبق بررسی های انجام شده، چای سبز نه تنها تعداد سلولهای مرده قلب و مغز را بعد از حمله قلبی و یا سکته مغزی کاهش می‌دهد بلکه بوسیله (EGCG[14]) که به نظر می‌رسد ماده موثره اصلی چای سبز می‌باشد در تسریع بهبودی بعد از سکته و حمله قلبی کمک می کند(۱۰).
۲-۱۱-۲-۶-حفاظت در مقابل انواع سرطان:
وجود کتچین در چای سبز حدوداً پنج برابر بیشتر از چای سیاه می‌باشد ، این ماده آنزیم دی‌هیدروفولات ردوکتاز را که سلولهای سرطانی برای رشد به آنها نیاز دارند، کاهش می‌دهد و دارویی بسیار مفید برای جلوگیری از سرطان به شمار می‌آید(۱۰).
۲-۱۱-۲-۷-جلوگیری از دیابت نوع ۲:
مطالعاتی که بر روی چای سبز انجام شده، نشان داده است که مصرف چای سبز همچنین از ابتلاء به دیابت نوع ۲ جلوگیری می کند. مصرف چای سبز میزان حساسیت به انسولین را در دیابت نوع ۲ بیشتر می‌کند. مطالعات جدید نشان داده‌اند که چای سبز در افراد مبتلا به دیابت حساسیت به انسولین و تحمل گلوکز را بهبود می‌بخشد. در یکی از آزمایشاتی که بر روی موشهای دیابتی انجام گرفت نتایج جالبی به دست آمده است؛ بعد از مصرف چای سبز به مدت ۱۲ هفته؛ میزان گلوکز، انسولین، تری گلیسیرید و اسیدهای چرب آزاد در خون موشها کاهش یافت و توانایی آنها در جذب انسولین افزایش پیدا کرد(۱۰).
۲-۱۱-۲-۸-کاهش وزن:
با نوشیدن چای سبز، متابولیسم(سوخت و ساز) چربی های بدن تسریع می شود و به این ترتیب چربی اضافی در بدن ذخیره نمی شود. پژوهشها نشان می دهد نوشیدن روزانه سه فنجان چای سبز می تواند تا ٧٠ کالری انرژی، ناشی از سوخت چربیها ایجاد کند. همچنین چای سبز قادر است جذب روده ای گلوکز و چربی را کاهش دهد و به این وسیله منجر به کاهش وزن در فرد می شود(۱۰).

فصل سوم
مواد و روش ها

۳-۱- روش های اجرایی کار :

۳-۱-۱- حیوان آزمایشگاهی مورد مطالعه :

در این آزمایش از موش سفید کوچک آزمایشگاهی نژاد NMRI به عنوان حیوان مورد آزمایش استفاده شد ، موش های ماده ابتدا از بخش حیوانات آزمایشگاهی پاستور خریداری شده و پس از انتقال به اتاق پرورش حیوانات مجتمع آزمایشگاهی بیمارستان شریعتی نسبت به نگهداری و انجام آزمون بر روی آنها اقدام شد .

۳-۱-۱-۱-دلایل انتخاب این حیوان به طور خلاصه عبارتند از :

دارا بودن شرایط فیزیولوژیک و رشد و نموی که تا حدود زیادی شبیه انسان است .

داشتن شناخت کافی از سیستم گوارشی حیوان .

کوچک بودن اندازه و آسان بودن نگه داری و مراقبت از آن

۳-۱-۱-۲-شرایط نگه داری حیوانات :

موش ها در اتاق پرورش حیوانات نگهداری شدند و با شرایط محیطی تطابق کافی پیدا کردند. جانوران در قفس های پلاستیکی استاندارد مخصوص نگهداری موش های کوچک، که غذا و آب کافی در دسترس آن قرار داشت نگهداری شدند و از تراشه های کوچک چوب به عنوان بستر زندگی آنها استفاده شد. تغذیه حیوانات از پلیت های آماده و مخصوص صورت گرفت و آب مورد استفاده، آب لوله کشی شهر تهران بود که توسط شیشه های آب خوری ویژه در اختیار حیوان قرار داده شد. درجه حرارت اتاق پرورش حیوانات ۲±۲۸ درجه سانتی گراد بود که در طی فصول گرم سال توسط کولر ، در طی فصول سرد سال توسط وسایل گرمایشی ، این درجه حرارت تأمین می شود.
رطوبت اتاق پرورش حیوانات نیز در حد استاندارد تنظیم گردید. به منظور دقت هر چه بیشتر در انجام آزمایش ها، قفس موش هر هفته دو بار شستشو و با الکل ضد عفونی می شد. میزان نور اتاق نگهداری حیوانات طوری تنظیم شده بود که حیوانات ۱۲ ساعت در نور کافی و ۱۲ ساعت در تاریکی قرار می گرفتند.