C1

 

 

C0

 

 

 

 

 

۱۰۰

 

 

۷۵

 

 

۵۰

 

 

۲۵

 

 

۰

 

 

غلظت (mg/L)

 

 

 

۰

 

 

۵/۲

 

 

۵

 

 

۵/۷

 

 

۱۰

 

 

متانول %۵۰ (ml)

 

 

 

۱۰

 

 

۵/۷

 

 

۵

 

 

۵/۲

 

 

۰

 

 

گالیک اسید

 

 

برای سنجش غلظت­های مختلف گالیک اسید، مطابق مراحل ذکر شده برای عصاره عمل شد. بلانک نیز به همین ترتیب با ۱۰۰ میکرولیتر متانول ۵۰% به­جای محلول گالیک اسید آماده شد. جذب غلظت­های مختلف گالیک اسید به ترتیب در طول موج ۷۶۵ نانومتر خوانده شد. منحنی استاندارد با در دست داشتن غلظت­های مختلف گالیک اسید و جذب هر کدام از غلظت­ها رسم و معادله منحنی استاندارد به­دست آمد. نتایج به­صورت میلی گرم گالیک اسید به ازای یک گرم نمونه خشک محاسبه شد.

منحنی استاندار گالیک اسید (بر حسب میلی گرم بر لیتر)
۲-۱۴ اندازه گیری پتاسیم به روش نشر شعله­ای (AES)
۲-۱۴-۱ تهیه عصاره گیاه به روش سوزاندن خشک و ترکیب باHCL
برای اندازه ­گیری پتاسیم موجود در بافت خشک گیاه، در ابتدا نیاز به تهیه­ عصاره از گیاه می­باشد. به این منظور ۵/۰ گرم پودر نمونه خشک شده با دقت ۰۰۱/۰ گرم توزین و در کروزه چینی ریخته و در کوره با حرارت معمولی قرار داده شد. درجه حرارت کوره به تدریج و در عرض ۲ ساعت به ۵۵۰ درجه رسید. کروزه­ها بسته به نوع بافت (برگ و ساقه) به طور میانگین ۴ ساعت در این حرارت نگه داشته شدند. بعد از اتمام این مدت، کوره خاموش شد و کروزه­ها از کوره خارج گردید. بعد از خنک شدن، خاکسترها با کمی آب خیس و با شیشه ساعت پوشانده شدند. به آرامی ۱۰ میلی­لیتر اسید هیدروکلریک ۲ مولار به هر یک از آن­ها اضافه گردید. بعد از اتمام فعل و انفعالات، محتویات کروزه از کاغذ صافی به داخل بالن ژوژه ۱۰۰ میلی­لیتری صاف شد. کروزه و کاغذ صافی چندین بار با آب مقطر شسته و به حجم رسانیده شد. برای جلوگیری از تغییرات غلظت، عصاره در ظرف­های در بسته و در یخچال با دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری شد. عصاره­ی به­دست آمده برای سنجش عنصر پتاسیم استفاده گردید.
۲-۱۴-۲ تهیه محلول ها
تهیه استاندارد غلیظ پتاسیم به غلظت ۵۰۰۰ میلی­گرم در لیتر:
۵۳۴/۹ گرم از پودر کلرید پتاسیم را در کمی آب مقطر حل کرده و در بالن ژوژه­ی ۱۰۰۰ میلی­لیتری ریخته و به حجم رسانیده شد.
سری محلول­های استاندارد:
۰، ۲، ۴، ۶، ۸، ۱۰ میلی­لیتر از استاندارد غلیظ را با پی­پت برداشته و در بالن ژوژه­ی ۱۰۰ میلی­لیتری ریخته و به حجم رسانیده شد.
۲-۱۴-۳ روش کار
سری محلول­های استاندارد و نمونه شاهد و عصاره­ی گیاه به نسبت ۹+۱ با آب مقطر رقیق گردید. سپس شدت نور امیشن حاصل از نمونه­های عصاره، شاهد و سری محلول­های استاندارد با دستگاه فلیم امیشن (فلیم فتومتر) با بهره گرفتن از فیلتر پتاسیم و با بکارگیری گاز پروپان با هوا اندازه ­گیری شد. مقدار پتاسیم در ماده­ی خشک گیاهی بر حسب گرم درصد از رابطه زیر محاسبه گردید.
(a+b)
a- غلظت پتاسیم در نمونه­ رقیق شده بر حسب میلی­گرم در لیتر (ppm)
b- غلظت پتاسیم در شاهد بر حسب میلی­گرم در لیتر (ppm)
v- حجم عصاره حاصل از عمل هضم بر حسب میلی لیتر
w- وزن نمونه ی گیاه بر حسب گرم

منحنی کالیبراسیون غلظت های استاندارد پتاسیم
۲-۱۵ تجزیه آماری
تجزیه آماری داده ­ها با بهره گرفتن از نرم­افزار (۱۶٫۰) SPSSو برای مقایسه میانگین داده ­ها از آزمون Duncan استفاده شد. انحراف از میانگین داده ­ها به­وسیله خطای استاندارد نشان داده شد. جهت رسم نمودارها از نرم افزار Excel 2007 استفاده شده است.
فصل سوم
نتایج
۳-۱ اندازه ­گیری مقادیر پرولین
در این مرحله جذب غلظت­های مختلف پرولین به­ترتیب در طول موج ۵۲۰ نانومتر خوانده شد. منحنی استاندارد با در دست داشتن غلظت­های مختلف پرولین و جذب هر کدام از غلظت­ها رسم و معادله منحنی استاندارد به­دست آمد. جذب به­دست آمده از هر سه برداشت در معادله منحنی استاندارد قرار داده شد و غلظت هر نمونه بر حسب میکروگرم پرولین بر یک گرم وزن تر گیاه بدست آمد.
۳-۱-۱ نتایج حاصل از سنجش پرولین در چین اول
در چین اول در غلظت صفر (شاهد هوگلند) و غلظت­های ۱ و ۲ نانو کلات پتاسیم، کاهش مقادیر پرولین نسبت به شاهد ۴۸ ساعت پس از تنش خشکی معنی­دار نبود. اما همانطور که در شکل ۳-۱ مشاهده می­ شود، در غلظت ۳ نانو کلات پتاسیم مقادیر پرولین نسبت به مقادیر آن در نمونه­های تحت تنش کاهش می­یابد.
شکل۳-۱٫ تغییرات مقادیر پرولین در چین اول. داده ­ها میانگین سه تکرار ± خطای معیار (SE) می­باشند. حروف متفاوت نشان دهنده وجود اختلاف معنی­دار میان تیمارها بر اساس مقایسه میانگین­ها با آزمون دانکن و حروف مشترک بیانگر عدم وجود اختلاف معنی­دار در سطح احتمال P<0.5 می­باشد.
۳-۱-۲ نتایج حاصل از سنجش پرولین در چین دوم
در چین دوم در تمام غلظت­ها، کاهش معنی­داری در مقدار پرولین نسبت به شرایط تنش دیده می­ شود و با افزایش غلظت نانو کلات پتاسیم، مقدار پرولین بیشتر کاهش پیدا می­ کند.
شکل ۳-۲٫ تغییرات مقادیر پرولین در چین دوم. داده ­ها میانگین سه تکرار ± خطای معیار (SE) می­باشند. حروف متفاوت نشان دهنده وجود اختلاف معنی­دار میان تیمارها بر اساس مقایسه میانگین­ها با آزمون دانکن و حروف مشترک بیانگر عدم وجود اختلاف معنی­دار در سطح احتمال P<0.5 می­باشد.
۳-۱-۳ نتایج حاصل از سنجش پرولین در چین سوم
کاهش مقادیر پرولین در چین سوم در هر ۴ غلظت نسبت به شاهد بعد از ۴۸ ساعت تنش خشکی معنی­دار بود (شکل۳-۳).
شکل ۳-۳٫ تغییرات مقادیر پرولین در چین سوم. داده ­ها میانگین سه تکرار ± خطای معیار (SE) می­باشند. حروف متفاوت نشان دهنده وجود اختلاف معنی­دار میان تیمارها بر اساس مقایسه میانگین­ها با آزمون دانکن و حروف مشترک بیانگر عدم وجود اختلاف معنی­دار در سطح احتمال P<0.5 می­باشد.
میانگین داده ­های حاصل از چین اول، دوم و سوم، کاهش معنی­دار مقادیر پرولین را در غلظت­های ۲ و ۳ در چین اول و تمام غلظت­های چین دوم و سوم نسبت به شاهد بعد از ۴۸ ساعت تنش خشکی نشان داد. همانطور که در شکل ۳-۴ دیده می­ شود، بیشترین کاهش مقدار پرولین در غلظت ۳ در چین دوم و سوم با میانگین mg/g.dw 62/6 نسبت به شاهد بعد از ۴۸ ساعت تنش خشکی (میانگین ۹۲/۱۹) مشاهده شد و کمترین کاهش مربوط به غلظت صفر (شاهد هوگلند) و ۱ نانو کلات پتاسیم در چین اول با میانگین داده mg/g.dw 78/15 دیده شد.

 

برای دانلود متن کامل پایان نامه به سایت zusa.ir مراجعه نمایید.