با بهره گرفتن از محلول مادر، برای بررسی حجم محلول، محلول‌های به حجم های mL400-50 و غلظت µgmL^-1 ۱ ساخته شده ، به درون ارلن‌های منتقل شدند و pH آنها با بهره گرفتن از محلول سود رقیق روی ۱۰ تنظیم شد. به هر کدام از ارلن‌ها مقدار g07/0 جاذب و mL5از محلول (W/V) %2/0CTAB اضافه شد. سپس به مدت ۷ دقیقه در حمام اولترا‌سونیک، قرارداده شد. ذرات جامد ته نشین شده را با آهن ربا جدا کرده، محلول رویی دکانته شد. mL1 متانول (حلال) به ذرات جامد اضافه شد، مجددا به مدت۲ دقیقه در حمام اولترا‌سونیک، قرارداده شد. ذرات جامد ته نشین شده را با آهن ربا جدا کرده و محلول داخل ارلن‌ها را دکانته کرده، سپس طیف همه‌ی محلول‌ها پس از تصحیح خط پایه در محدوده ی nm400-200 با دستگاه UV-Vis ثبت شد. سپس مقدار سیگنال جذبی هر محلول در طول موج nm290خوانده شد.

۳-۴-۹ نمونه ی حقیقی
۳-۴-۹-۱ نمونه‌های آب
نمونه ی آب شهر از آب شیر آزمایشگاه (شهرک غرب-تهران)، آب چاه (شهرک غرب-تهران) گرفته شد. از هر نمونه آب، ۳ نمونه‌ی mL100 با غلظت‌های µgmL^-1 ۰، ۵/۰ و۱ از محلول مادر µgmL^-1 ۱۰۰ اضافه شد. سپس pH آن‌ها روی ۱۰ تنظیم شد. مقدار mL5از محلول (W/V) %2/0 CTAB و g07/0  به همه‌ی محلول‌ها اضافه شد. سپس به مدت ۷ دقیقه در حمام اولتراسونیک قرارداده شد، ذرات جامد ته نشین شده را با آهن ربا جدا کرده، محلول رویی دکانته شد. مقدار ۱ میلی لیتر از متانول به ذرات جامد اضافه شد و ۲دقیقه قرارداده شد. بقیه‌ی مراحل همان‌طور که در مراحل قبل توضیح داده شد انجام شده و طیف همه‌ی محلول ها پس از تصحیح خط پایه در محدوده‌ی nm400-200 با دستگاه UV-Vis ثبت شد. سپس مقدار سیگنال جذبی هر محلول در طول موج nm290 خوانده شد. برای ارزیابی تکرار پذیری، این آزمایش در هر غلظت سه بار تکرار شد.
۳-۴-۹-۲ نمونه‌ی پلاسما انسان
مقدار mL3 پلاسما از داوطلبی که داروی پنتاپرازول را مصرف نمی‌کرد، گرفته شد. پلاسمای گرفته شده بلافاصله به درون لوله سانتریفیوژ منتقل شده و به مدت ۲۰ دقیقه با سرعت rpm4000 سانتریفیوژ گردید. سپس محلول روی پلاسما به درون لوله آزمایش منتقل شده وتا زمان آنالیز در فریزر (دمای ۲۰- درجه سانتی گراد) نگهداری شد. در هنگام آنالیز محلول پلاسمای یخ زده را برای انجام آزمایش در دمای محیط قرار داده تا دمای آن به دمای محیط آزمایشگاه برسد. سپس از محلول پلاسما، ۳ نمونه به مقدار µL100 به درون بالن‌های mL100 انتفال گردید و با غلظت‌‌های µgmL^-10، ۵/۰ و ۱ از محلول مادر µgmL^-1100، افزایش استاندارد گردید، سپس با آب مقطر به حجم mL100 رسانده شد. pH هر محلول روی ۱۰ تنظیم گردید. مقدار mL5از محلول (W/V) %2/0 CTAB و g07/0  به همه‌ی محلول‌ها اضافه شد، سپس به مدت ۷ دقیقه در حمام اولتراسونیک، قرارداده شد، ذرات جامد ته نشین شده را با آهن ربا جدا کرده، محلول رویی دکانته شد. مقدار ۱ میلی لیتر از متانول به ذرات جامد اضافه شد و۲ دقیقه قرارداده شد. بقیه مراحل همان‌طور که در مراحل قبل توضیح داده شد انجام شده و طیف همه‌ی محلول‌ها پس از تصحیح خط پایه در محدوده‌ی nm400-200 توسط دستگاه UV-Vis ثبت شد. سپس مقدار سیگنال جذبی هر محلول در طول موج nm290 خوانده شد. برای ارزیابی تکرار پذیری، این آزمایش در هر غلظت سه بار تکرار شد [۸].
فصل چهارم
بحث و نتیجه‌گیری
۴-۱ منحنی کالیبراسیون
ابتدا محلول مادر داروی پنتوپرازول با غلظت µgmL^-1100 تهیه گردید. سپس از این محلول مادر با بهره گرفتن از آب دو بار تقطیر محلول‌های استاندارد با غلظت‌هایµgmL^-1 ۱/۰، ۳/۰، ۵/۰، ۷/۰، ۱، ۲/۱، تهیه شد. pH هر یک از محلول ها در pH برابر با۱۰توسط سود تنظیم شد. مقدار mL5از محلول (W/V) %2/0 CTAB و g07/0  به همه‌ی محلول‌ها اضافه شد، سپس به مدت ۷دقیقه در التراسونیک قرارداده شد. ذرات جامد ته نشین شده را با آهن ربا جدا کرده و محلول رویی دکانته شد. مقدار ۱ میلی لیتر از متانول به ذرات جامد اضافه شد و ۲دقیقه دوباره در التراسونیک قرارداده شد. ذرات جامد ته نشین شده را با آهن ربا جدا کرده و محلول رویی دکانته شد، جذب هر یک از محلول‌ها پس از تصحیح خط پایه در محدوده ی nm400-200 توسط دستگاه UV-Vis خوانده شد. سپس مقدار سیگنال جذبی هر محلول در طول موج nm290 خوانده شد. نتایج خوانده شده در جدول (۴-۱) نشان داده شده است.
جدول (۴-۱) منحنی کالیبراسیون

منحنی کالیبراسیون داروی پنتوپرازول در نمودار (۴-۱) نشان داده شده است.
نمودار (۴-۱) منحنی کالیبراسیون
۴-۲ بهینه سازی
پارامترهای مختلف مؤثر بر راندمان استخراج شامل pH، حجم محلول نمونه، مقدار CTAB، مقدار  و زمان استخراج می باشد. و پارامترهای مؤثر بر راندمان جذب که شامل نوع حلال، حجم حلال و زمان واجذبی می باشد نیز بهینه شد.
۴-۲-۱ بررسی اثر pH